小鼠單克隆抗體的制備過程

　　小鼠單克隆抗體的制備過程

　　小鼠單克隆抗體制備的核心是通過?雜交瘤技術?將免疫小鼠的B細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選出能穩定分泌特異性抗體的雜交瘤細胞。以下是關鍵步驟與要點：

　　1. ?抗原免疫小鼠?

　　抗原選擇?：需高純度蛋白(>90%)或偶聯載體的小分子抗原(如KLH偶聯多肽)?。

　　佐劑乳化?：

　　初次免疫?：抗原與弗氏wanquan佐劑(FCA)乳化(油包水狀態)?。

　　加強免疫?：后續使用弗氏不wanquan佐劑(FIA)或直接注射抗原?。

　　免疫方案?：

　　皮下多點注射(如腋下、腹股溝)，間隔2-4周加強免疫3-5次?。

　　末次免疫后3-5天檢測血清效價(ELISA效價≥1:10,000為合格)?。

　　2. ?細胞融合與雜交瘤篩選?

　　脾細胞制備?：處死免疫小鼠，無菌取脾，研磨成單細胞懸液?。

　　融合條件?：

　　脾細胞與骨髓瘤細胞(如SP2/0)按1:3比例混合，聚乙二醇(PEG)誘導融合?。

　　HAT培養基篩選?：

　　未融合的B細胞和骨髓瘤細胞因缺乏HGPRT酶而死亡，僅雜交瘤細胞存活?。

　　3. ?雜交瘤克隆化與抗體檢測?

　　有限稀釋法?：將雜交瘤細胞稀釋至0.5-1個細胞/孔，培養后篩選單克隆?。

　　抗體檢測?：

　　ELISA或Western Blot驗證抗體特異性與效價?。

　　陽性克隆擴增后，通過腹水法或體外培養大量生產抗體?。

　　4. ?抗體純化與保存?

　　粗提?：硫酸銨沉淀法濃縮腹水或培養上清?。

　　精細純化?：Protein A/G親和層析或抗原偶聯柱純化?。

　　保存條件?：

　　短期：4℃加0.02%NaN?(1-6個月)?。

　　長期：-20℃或-80℃分裝凍存?。

　　關鍵注意事項

　　動物倫理?：遵循實驗動物福利規范，減少免疫與采血痛苦?。

　　批次差異?：多克隆抗體易受動物個體差異影響，需嚴格質控(如SDS-PAGE純度檢測)?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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