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ELISA試劑盒檢測不成功的原因及解決方案
1. 低信號強度(靈敏度不足)
可能原因：
抗原/抗體濃度不足或孵育時間過短。
酶標記物(如HRP)失活或底物(如TMB)避光不當。
解決方案：
延長抗體孵育時間(如4℃過夜)或增加酶標記物濃度。
顯色反應嚴格避光，避免底物降解。
2. 高背景信號
可能原因：
封閉不充分(如BSA或脫脂牛奶封閉時間不足)。
洗滌不凈(殘留未結合的酶或底物)。
解決方案：
延長封閉時間(≥30分鐘)并確保洗滌液充分浸泡孔內。
控制溫育溫度(37℃±0.5℃)，避免蒸發導致濃度異常。
3. 重復性差(復孔差異大)
可能原因：
加樣量不一致或移液器未校準。
孵育時間/溫度波動(如頻繁開蓋)。
解決方案：
使用校準后的移液器，同步加樣時間。
使用恒溫箱并減少開蓋次數。
4. 樣本問題
可能原因：
樣本溶血、反復凍融或細菌污染。
保存條件不當(如未分裝導致反復凍融)。
解決方案：
離心后取上清，避免溶血干擾;分裝保存于-80℃。
短期檢測樣本可4℃保存，長期需凍存。
5. 操作流程問題
可能原因：
顯色時間不足或過長(超出說明書范圍)。
試劑污染或過期(如酶標板未密封)。
解決方案：
嚴格按說明書控制顯色時間(通常10-15分鐘)。
使用新鮮試劑，避免交叉污染(如更換吸頭)。
6. 其他干擾因素
溫度波動：水浴或恒溫箱需預熱至平衡溫度，避免疊放微孔板。
時間差異：大批量樣本建議分批操作，減少操作時差。
通過優化上述環節，可顯著提高ELISA檢測的準確性和重復性。
注：以上資料供參考，不作為實驗依據，如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。
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