BUNSEN本生：血清使用時的一些注意事項

　　BUNSEN本生：血清使用時的一些注意事項

　　使用血清的時候，需注意的操作 :

　　1、凍結血清時，請按照所主張的逐步凍結法(-20℃至4℃至室溫)，若血清凍結時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，試驗顯示十分簡單發生沉淀物。

　　2、凍結血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉淀的發生。

　　3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，以致血清中許多較不穩定的成分也會因此遭到損害，而影響血清的質量。

　　4、血清的熱滅活十分簡單形成沉淀物的增多，若非必要，能夠無須做此步驟。

　　5、若有必要做血清的熱滅活，請恪守56℃，30 分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會形成沉淀物的增多。

　　一、儲存條件

　　血清一般儲存于-20 ℃，同時應避免反復凍融。若存放于 4 ℃ 時，請勿超過一個月。

　　二、血清中絮狀沉淀的處理

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白，這是正常特性，不會影響產品性質。

　　離心血清(400 g，1-2 分鐘)或簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里。

　　大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至 37 ℃就會再溶解。

　　一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾。

　　三、使用濃度

　　一般為 5-20 % ，是 10 %。過多血清容易使培養中的細胞發生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發生惡性轉化。

　　四、解凍方法

　　血清從冰箱取出后應慢慢地解凍。最好在 4 ℃ 低溫冰箱里放置一天或直到融化為止。如果時間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法：

　　1. 將血清從冰箱里取出后，在室溫下放置 15-20 分鐘。

　　2. 然后將血清放置在 37 ℃ 水浴槽里。過高溫度會導致血清出現渾濁現象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子。

　　3. 每隔 5 分鐘左右適當搖晃瓶子，直到地解凍為止。

　　五、熱滅活方法

　　加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養 ES 細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活，請遵守56 ℃，30 分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

　　1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。

　　2. 在血清解凍時，將一個容器裝入適量的水，用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內水的溫度。容器大小、質地和裝水的量最好與裝血清的瓶子相同或相似。

　　3. 待血清解凍時，將含有血清的瓶子放在預熱的 56 ℃水浴里，不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子，以免導致污染。

　　4. 在開始加熱處理時，要及時使用溫度計測定模擬瓶內水的溫度。

　　5. 在預熱期間，每隔 3-5 分鐘要適當搖晃含有血清和水的瓶子，確保瓶內液體均勻加熱。

　　6. 一旦模擬瓶內的水溫達到 55.8± 0.5 ℃時，開始計時，并在此溫度范圍內熱處理 30 分鐘，然后立即放在冰上冷卻。

　　為防止在熱處理過程中由蛋白質變性而導致的渾濁和沉淀現象，熱處理時應注意下列事項：

　　1. 不要用高于 25 ℃ 以上的溫度加快解凍速度。

　　2. 在熱處理之前，要使血清融解。

　　3. 不要使熱處理的溫度高于 56.3 ℃

　　4. 熱處理時間不要長于 30 分鐘。

　　5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清。

　　六、避免事項

　　1.避免反復凍融

　　長時間儲存在 2-8 ℃ 時，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。

　　2.避免產生沉淀

　　解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

　　血清分裝時，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

　　勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

　　勿將血清置于 37 ℃ 太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

　　七、建議事項

　　一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

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