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    ELISA實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):ELISA實(shí)驗(yàn)過程中會(huì)遇到哪些問題,如何解決

    更新時(shí)間:2023-12-11    點(diǎn)擊次數(shù):939

      標(biāo)簽:ELISA 本生 試劑盒 抗原 抗體 酶標(biāo)記抗體


      ELISA實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):ELISA實(shí)驗(yàn)過程中會(huì)遇到哪些問題,如何解決!

      高背景信號:

      可能原因

      洗板不充分;  樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中含干擾物;  緩沖液受污染;

      解決方法

      將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保洗滌充分;  確保在洗滌前棄掉了所有殘留抗體溶液;  設(shè)置空白對照;  重新配制緩沖液;

      無型號:

      可能原因

      試劑添加順序錯(cuò)誤或試劑配制有誤;  HRP被疊氮化合物污染;  抗體用量不足;

      解決方法

      重復(fù)實(shí)驗(yàn);  檢查試劑配制方法;  復(fù)核試驗(yàn)試劑添加流程;  使用新鮮配制的試劑;  使用推薦的抗體量;

      整版呈規(guī)則藍(lán)色:

      可能原因

      洗板不充分或跳過洗板步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶;  封板膠紙或試劑儲(chǔ)液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染;  緩沖液有金屬或HRP污染;

      解決方法

      嚴(yán)格按照說明書洗滌流程操作;  每步均需使用新的封板膜或試劑儲(chǔ)液槽;  配制新鮮緩沖液;

      標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳梯度不明顯:

      可能原因

      實(shí)驗(yàn)操作流程有誤  標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計(jì)算錯(cuò)誤;

      解決方法

      嚴(yán)格按照說明書操作流程;  重新計(jì)算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線;

      板內(nèi)重復(fù)性差:

      可能原因

      洗板不充分;  重復(fù)使用封板膠紙;  未使用封板膠紙;

      解決方法

      將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保洗滌充分;  每步均需更換使用新的封板膠紙;  需使用封板膠紙;

      板間重復(fù)性差:

      可能原因

      洗板不充分;  孵育溫度發(fā)生變化;  操作流程改變;  封板膠紙重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染;

      解決方法

      將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保洗滌充分;  確保已在洗滌前棄掉所有殘留溶液;  嚴(yán)格按照推薦的溫度孵育;  勿在環(huán)境溫度變化大的地方孵育;  嚴(yán)格按照相同的操作流程;  每一步均使用新的封板膠紙;

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